中压层析柱的操作步骤

　　中压层析柱是利用生物分子间所具有纯化技术，它是利用生物分子间存在的特异性相互作用，通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。
 

　　中压层析柱的操作步骤：
 

　　1 准 备
 

　　在装柱前，建议采用静置沉淀法，确定胶悬液浓度，我们的填料是以50%的浓度储存在20%的乙醇中。
 

　　2 检 查
 

　　装柱需借助装柱系统完成，所有的组件必须处于完好的状态，检查玻璃部件，特别注意端部，应更换末端有缺口的柱子。
 

　　3 清 洗
 

　　柱子和装柱器在使用前，应用20%乙醇润洗，检查筛板，确保所选筛板的孔径和所选填料的粒径相匹配，确保底端部件和顶部适配器的管件连接牢固。
 

　　4 安 装
 

　　1) 柱子用柱夹或铁架台固定，确保柱管没有倾斜，垂直于地面，避免装好的柱子出现宽泛而弯曲的条带。
 

　　2)向柱中加入蒸馏水或20%乙醇至几厘米的高度，利用重力作用让柱中液体从底端管线中流出，排出气泡，在柱底预留至少1厘米高度的液体，并用堵头连接管线的锥形接头。
 

　　3)再次混匀胶悬液，确保悬液均一，借助玻璃棒将胶悬液尽可能一次性贴壁倒入柱管中，用装柱缓冲液加满柱管。
 

　　4)将适配器管线连接注射器，排出适配器管线中的气泡。逆时针旋转调节帽将固定帽、调节帽旋转至调节杆最底端。
 

　　5)打开底部管线堵头，将适配器垂直放在玻璃管上，顺时针拧紧固定帽，请确保整个操作在一条直线上完成。注意不要引入气泡。
 

　　6)按照填料说明书推荐的流速运行设备，不同的填料推荐的装柱流速不同，很多填料会需要分2个阶段进行装柱，第一步用推荐流速加快沉降，第二步用更高的流速(不超过推荐流速的30%)压实填料，请在流速开启前阅读填料说明书。继续运行至胶面稳定，读取刻度并记录。
 

　　7)停止设备流速，将适配器顺时针向下拧至读取刻度下2~3mm，继续运行流速，如果胶面发生改变，可以重新调节适配器高度。装柱完成。